Le système PRIMO évolue vers une version plus compacte, avec un schéma optique permettant la microscopie en fluorescence, et plus rapide : PRIMO 2.
Micropatterning, polymérisation d’hydrogels et microfabrication, le tout dans un seul appareil. Créez des micro-environnements cellulaires in vitro sur mesure et obtenez de meilleurs modèles cellulaires pour vos expériences de biologie cellulaire ou pour l’imagerie en cryo-ET.
L’étude de l’influence du microenvironnement sur les mécanismes intracellulaires et intercellulaires est essentielle pour la recherche en biologie cellulaire. Pourtant, malgré les avancées scientifiques et technologiques, les chercheurs sont régulièrement confrontés à de nombreux défis, tels que :
• les problèmes récurrents de reproductibilité,
• la fiabilité en terme de pertinence physiologique,
• mais aussi le degré de facilité de manipulation,
• et l’efficacité.
C’est pourquoi notre équipe de recherche a développé PRIMO: un système de photopatterning capable de créér des microenvironnements cellulaires in vitro ajustés à différentes conditions expérimentales.
Le système PRIMO évolue vers une version plus compacte, avec un schéma optique permettant la fluorescence, et plus rapide : PRIMO 2.
Project Leader, Jorge Ferreira, i3S, Portugal
L’association de 3 produits spécialement conçus pour le prototypage et la production
de micro-environnements in vitro sur-mesure !
Développé par l’équipe scientifique d’Alvéole d’après la technologie LIMAP* (Strale P.O. et al, Adv Mater. 2016), le système de photopatterning sans masque PRIMO (dispositif à micro-miroirs, DMD) peut générer in vitro des micro-environnements cellulaires sur-mesure, grâce à 3 techniques: micropatterning, structuration d’hydrogels et microfabrication.
Le processus PRIMO pour des modèles cellulaires in vitro optimisés :
Le système de micropatterning PRIMO permet de finement contrôler l’adhésion cellulaire pour imiter les phénotypes in vivo, étudier les mécanismes cellulaires ou isoler les cellules dans des conditions reproductibles pour des tests standardisés.
Le système PRIMO de photopatterning par DMD peut réaliser une photolithographie en niveaux de gris sur des résines spécifiques pour générer des moules 3D complexes tels que des rampes, des puits convexes ou des puces microfluidiques pour créer des organes sur puce.
En tant que système de photopatterning, PRIMO peut également polymériser et photo-scissionner les hydrogels les plus couramment utilisés pour la culture cellulaire 3D, la formation de sphéroïdes ou la polymérisation de membranes perméables dans des puces microfluidiques.
substrats
standards
de culture cellulaire*
*Plat ou structurés, rigides ou mous : Lames, lamelles, hydrogels, PDMS, dispositifs de microfluidique, etc.
1,2µm
sur tout le champ
d’observation*
*Environ 500×300µm, objectif 20x
256
niveaux de gris
3
suivant les conditions
expérimentales
connexion LLG
*La lumière d’excitation sera réfléchie par le DMD et projetée vers la lentille de tube.
Loin de se limiter à la mécanobiologie (connue comme l’analyse in vitro des mécanismes intra et intercellulaires sur cellules vivantes), le micropatterning s’avère être un allié précieux pour différents domaines de recherche, tels que la modélisation de maladies, l’immunologie, la toxicologie, et plus récemment pour la cryo-tomographie électonique (cryo-ET).
La cryo-tomographie électronique étant une technique de microscopie encore très récente, toutes les étapes du procédé sont régulièrement améliorées par les laboratoires universitaires et également par les sociétés industrielles.
En contrôlant l’adhérence, l’étalement et la forme des cellules, le micropatterning surmonte les problèmes rencontrés à la toute première étape du procédé de cryo-ET, à savoir la qualité des échantillons cellulaires.
En savoir plus sur l’utilisation du micropatterning sur grilles de TEM
Notre préoccupation principale chez Alvéole est de développer des solutions innovantes qui répondent à vos besoins d’améliorer la qualité dess modèles cellulaires pour la biologie et la microscopie.
Dans le cas de la cryo-ET, nous partageons cette philosophie d’excellence avec Leica Microsystems. Nous avons donc logiquement uni nos forces et nos produits – PRIMO, le système de cryogénisation EM GP2 de Leica, le système d’imagerie THUNDER EM Cryo CLEM et les solutions additionnelles en cryo CLEM – en un processus optimisé et plus efficace!
+ infos sur le THUNDER Imager EM Cryo CLEM de Leica
En contrôlant précisément l’adhésion cellulaire sur les grilles de TEM, le système de micropatterning sans masque PRIMO permet de surmonter le premier problèmes lié à la préparation de cellules pour la cryo-ET : obtenir des cellules compatible au procédé.
Intégrez le système de micropatterning PRIMO comme première étape aux flux de travail Cryo CLEM de Leica Microsystems et rendez votre processus de préparation d’échantillons cryo-ET encore plus fiable et efficace!
Micropatterning
→ adhérence contrôlée
Vitrification
Microscopy Correlative
→ Taux de réussite élevés
FIB milling
→ Plusieurs cellules
Tomographie électronique
→ Plusieurs lamelles
Protéines en contexte cellulaire
Optimisez rapidement vos conditions expérimentales par vous-même!
Téléchargez l’image que vous souhaitez pour structurer et / ou fonctionnaliser la surface de votre substrat!
Utilisez vos substrats habituels de
culture cellulaire : plats ou microstructurés, rigides ou mous.
Patterning de protéines : lames et lamelles de verre, plaques 96 puits, grilles pour la microscopie électronique, polystyrène, PDMS, gel de polyacrylamide (transfert), hydrogels.
Structuration d’hydrogels : hydrogels photo-réticulables, PEG Acrylate, Polyacrylamide, Agar, Matrigel.
Microfabrication : résines photosensibles.
Plus de 10 protéines utilisées quotidiennement par nos utilisateurs, dont les suivantes :
Fibrinogène-488, Fibrinogène-647, Fibronectine, GFP,
Neutravidine-488, Neutravidine-647, PLL-PEG-Biotine, Protéine A-647,
Streptavidine, ainsi que des anticorps primaires et secondaires.
Photopatterning successif de Fibrinogène-A488 en vert et Protéine A-A647 en rouge sur des micropiliers de PDMS microfabriqués avec PRIMO.
Image en microscopie à épifluorescence de points de Protéine A-488 de 1,5 µm espacés de 1,5 µm sur du PDMS.
Image en microscopie à épifluorescence de lignes de Protéine A-488 de 2 µm sur du verre.
Image en microscopie à épifluorescence d’un gradient de Fibrinogène A488 sur une lamelle de verre.
Microscopie par epifluorescence d’un micropattern de protéines grâce au schéma optique de la 2ème génération de module PRIMO.
« My interest is to understand the role of biophysical and topological properties of tissue microenvironments, such as stem cell niches, in modulating cell fate. Thus, the ability to precisely tune and control extracellular cell/organelle shape and geometry in 2D and 3D, is of critical importance. PRIMO has been incredibly useful in this regard! »
« The main interest of the Tardieux’s laboratory and my PhD project is to decipher how forces drive the unique motile and invasive capacities of the single-celled eukaryotic parasite Toxoplasma gondii. I was able to uncover that the parasite glides by coupling polar adhesions and de-adhesion with traction and dragging forces. The PRIMO technique was needed to create composite patterns with a non-adhesive area next to an adhesive one with the crucial request of a sharp demarcation. »
« We are working on the generation of 3D cellular microenvironments to reproduce Hematopoietic Niches. PRIMO will be used to generate 3D photo-polymerized microenvironments and to pattern them to localize different cell populations involved in the hematopoiesis. »
« Our aim is to develop in vitro experimentation to decipher guiding mechanisms involved in vivo. PRIMO technology is particularly adapted to design in vitro microdevices patterned with controlled patches of the signaling proteins relevant for white blood cell migration. »
« We are interested in imaging subcellular localization of certain cell-surface receptors and check whether they colocalize with focal-adhesion complexes. For this purpose, we are interested in making different types of patterns of Fibronectin with subcellular dimensions. »
« My research project aims at unravelling how a T cell switches from a fast migratory state to a stationary state upon activation. To do so, I perform live cell imaging of T cells migrating inside micro-fabricated channels coated with activating molecules. However, with this approach, I do not control when and where a T cell encounters the activating molecules. »
« Protein micropatterning represents an excellent tool to probe the behavior and functions of cellular systems. PRIMO is specially suited for our experiments, in which the cell-substrate interaction needs to be precisely adjusted both throughout the substrates and in time, in order to control the dynamic behaviour of cell monolayers. »
« Our research is at the frontier of soft matter physics and process engineering. More precisely, we develop microfluidic tools to study industrial processes (mixing, flow, drying, filtration, etc.) involving soft matter systems such as polymers or colloids. We use PRIMO to integrate hydrogel membranes in microfluidic devices to mimic ultrafiltration and dialysis processes on the scale of a few nanoliters. »
Notre équipe vous livre toutes ses astuces pour mener à bien vos manipulations expérimentales et aller encore plus loin !
Notre équipe de développement applicatif est à votre écoute pour répondre à vos questions et demandes et pour vous fournir plus d’informations sur nos produits !